老年扩张型心肌病与心脏β1和M2受体自身抗体研究

张麟 胡大一 曾文军 史旭波 李静 刘秀兰 徐立 崔亮

        近年来，许多学者发现在扩张型心肌病患者的血清中存在心脏G-蛋白偶联型β1-肾上腺素能受体与M2-胆碱能受体的自身抗体，并认为它们可能与扩张型心肌病(dilated carkiomyopathy，DCM)的发病有关。为明确这两种自身抗体在老年DCM的分布情况，我们检测部分老年DCM患者血清中β1-与M2受体的自身抗体，以期探讨这两种自身抗体在老年DCM发生、发展中的临床意义。
1.资料和方法
1.1 研究对象 老年DCM组：32例均为北京朝阳医院1998年10月至2000年6月的住院病人。其中男17例，女15例，年龄65～84岁，平均(74±9)岁，病史10～20年。心功能II～III级18例，IV级14例。非老年DCM组26例，男12例，女14例，心功能II～III级17例，IV级9例子，所有病例均符合WHO/ISFC1980年标准。全部病例均有心脏X线和超声心动图检查。对照组20名，年龄、性别与老年DCM组匹配。胸片、肝功能、尿常规检查均未见异常。以上2组均排除内分泌及自身免疫性疾病，采集血样的前3d避免服用免疫抑制剂和β-受体阻滞剂。老年DCM、非老年DCM和正常对照组临床特征见表1。

表1 老年DCM、非老年DCM和对照组临床特征比较
临床特征	老年DCM组	非老DCM组	正常对照组
病例数	32	26	20
年龄(岁)	74±9	56±13	76±11
性别(男/女)	17/15	12/14	11/9
左室舒张末径(mm)	67.6±13.6	63.7±11.9
左室收缩末径(mm)	67.6±13.6	67.6±13.6
左室射血分数(%)	29.5±7.6	36.2±6.9
心功能(NYHA*)	3.3±0.6	2.9±0.9

注：*NYHA=New York Heart Association
1.2 方法 抗原肽段由中国科学院生物分子研究所合成，相当于人β1肽段为197-222位的氨基酸序列：H-W-W-R-A-E-S-D-E-A-R-R-C-Y-N-D-P-K-C-C-D-F-V-T-N-R-C；M2肽段为169-193位氨基酸序列：V-R-T-V-E-D-G-E-C-Y-I-Q-F-F-S-N-A-A-V-F-F-G-T-A-I-C。
1.3 SA-ELISA检测 包被合成的抗原肽段→加入待测的人血清→加入标记生物素的抗人的IgC抗体→加入标记有辣根过氧化物酶的亲和素→加入辣根过氧化酶的底物→在酶标仪上测定反应物的光密度值。
1.4 判断标准 用比例法，以阳性血清与阴性血清的吸光度(A，曾称光密度OD)之比即P/N比值来判断，P/N≥2.1为阳性(P/N=标本A值-空白对照A值/阴性对照A值-空白对照A值)。抗体滴度的判定：将标本从1:20～1:160依次倍比稀释，以出现P/N≥2.1的最高稀释度作为该标本的滴度。
1.5 统计学处理 x2检验进行两样本阳性率的显著性检验，几何均数表示抗体滴度的平均值，两几何均数间显著差异用t检验。
2 结果
2.1心脏β1和M2受体自身抗体阳性率，老年DCM组明显低于非老年DCM组，但明显高于对照组(表2)

表2 3组心脏β1和M2受体自身抗体阳性率(%)比较
组别	例数	心脏β1	心脏M2
老年DCM组	32	9(28.1)*	10(31.1)*
非老年DCM组	26	14(53.8)△	15(57. 7)△
对照组	20	3(15.0)	4(20.0)

注：与对照组相比，*P<0.05；与老年DCM相比，△P< 0.05
2.2 老年DCM组心功能程度与两种自射抗体的阳性率之间无明显相关。但非老年DCM组心功能程度与两种自身抗体的阳性率呈显著负相关，心功能II～III级自身抗体的阳性率是心功能IV级的2倍左右(表3)。

表3 老年和非老年DCM组自身抗体与心功能程度相关性比较[阳性例数(%)]
心功能(NYHA)	老年DCM组			非老年DCM组
	例数	β1	M2	例数	β1	M2
II～III	18	5(27.8)	6(33.3)	17	11(64.7)	12(70.6)
IV	14	4(28.6)	4(28.6)	9	3(33.3)	3(33.3)
P值		>0.05	>0.05		<0.05	<0.05

3 讨论
　　国内外许多研究发现，心脏β1和M2受体的自身抗体参与扩张型心肌病的病理生理过程，并认为参与的程度在病程的早、中期大于晚期。本研究的第一阶段证实国人扩张型心肌病患者血清中存在心脏β1和抗M2受体的自身抗体，其阳性率略高于Magnusongu等的报道。本研究发现老年DCM的阳性率同国外报道接近。老年DCM患者血清中两种自身抗体阳性率明显高于正常人，但明显低于非老年DCM。表明心脏β1和M2受体的自身抗体可能参与心肌重构和/或心功能的病理变化，但参与程度随着年龄的增加而减弱。有研究报道正常人群心脏β1和M2受体自身抗体阳性率随年龄的增加而上升，老年人分别为15.1%和17.4%，表明心脏β1和M2受体自身抗体的产生不只限于扩张型心肌病，可能与老年人心肌组织和心肌细胞的正常老化、凋亡也有关，此项研究正在进行中。
　　本研究分析了老年DCM心功能等级与自身抗体阳性率的关系，心功能II～III级的阳性率和心功能IV级的阳性率相似。非老年组心功能II～III级的阳性率是心功能IV级的2倍及2倍以上，推测可能与抗体的动态变化有关，但动态变化在老年DCM组中并不明显，推测心肌细胞组织的正常凋亡也可能产生心脏β1和M2受体的自身抗体，有关研究正在进行中。另外，有研究发现，DCM患者抗ADP/ATP载体的自身抗体仅存在很短的时间，并认为可能与心力衰竭时神经体液调节失常引起的免疫抑制效应有关。以上均提示心脏β1和M2受体自身抗体在非老年DCM的发生发展中参与程度大于老年DCM。
　　心脏β1和M2受体自身抗体的产生与老年DCM相关，但相关程度低于非老年DCM；提示这两种自身抗体虽然参与老年DCM患者心肌重构和/或心力衰竭的病理生理过程，但在老年DCM患者心功能状态多属晚期的病程中，这两种自身抗体产生，可能是病理性免病机制的参与和生理性老化细胞凋亡的共同作用所致。