红细胞膜总胆固醇含量与急性冠脉综合征的相关性研究

安徽省医科大学第一附属医院  徐岩 余梅玫 王昌会 王晓晨 张建华 王爱玲

        摘要:

        目的：探讨红细胞膜总胆固醇含量（CEM）与急性冠脉综合征（ACS）的相关性。方法：204例胸痛患者行冠脉造影后分成三组：ACS组 98例，稳定型心绞痛（SAP）组45例和对照组即胸痛不典型且冠脉造影正常者61例。测定各组CEM水平及血浆hs-CRP水平。结果：ACS组患者CEM值为 (149.50 μg/mg，120.33 -180.11 μg/mg)，较SAP组 (79.98 μg/mg，56.75- 97.56 μg/mg) 以及对照组 (76.64 μg/mg，range 62.12 to 91.84 μg /mg) 明显增高（P<0.01）。 多因素逻辑回归分析提示CEM与ACS显著相关 (OR 24.990，95%CI 5.22 to 119.596，p<0.01)。ROC分析显示CEM曲线下面积(0.907)大于hs-CRP曲线下的面积 (0.767)，两者之间差异有显著性（p < 0.01）。结论：CEM与ACS具有相关性，CEM可能是动脉粥样易损斑块的一个潜在的标记物，且CEM作为ACS的诊断指标可能优于hs-CRP。
 

        资料与方法

        1 研究对象
        1.1 入选标准：选择2008年6～10月安徽医科大学第一附属医院因胸闷/胸痛住院并行选择性冠状动脉造影患者204例（连续性病例），结合其临床症状及造影结果分为：ACS组98例（心肌梗死20例及不稳定性心绞痛78例）、SAP组45例、对照组即胸痛不典型且冠脉造影正常者61例（58+11岁)。ACS包括不稳定型心绞痛、非ST段抬高型心肌梗死和ST段抬高型心肌梗死。

        1.2 排除标准：既往曾发生ACS、有过量饮酒史、有血液学、肾脏、肝脏、甲状腺疾病、恶性肿瘤史、家族性高脂血症、三个月内行外科手术、正在服用抗炎药及激素替代治疗、异常红细胞记数（男:<4.0 或>5.5×1012/l  女：<3.5或>5.0×1012/l )、异常血红蛋白量 (男：<120 g/l 或>160 g/l  女：<110 g/l 或>150 g/l )。

        2 血管造影检查
        应用PHILIPS Allura Xper-FD10 (Philips, Holland)系统对所有患者进行选择性冠脉造影检查，由两位有丰富介入治疗经验的心血管医师判断评估冠脉病变的程度，其程度按病变血管（管腔狭窄50%以上）的数目来评估[3]。

        3 实验室检查
        分离红细胞，并制备红细胞膜样品，膜蛋白浓度用Bradford方法来测定，细胞膜胆固醇含量采用酶学方法来测定（试剂盒购于美国Rapidbio公司）[4]，血浆 hs-CRP用ELISA法测定（试剂盒购于美国RnD公司），血浆胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）、载脂蛋白A（ApoA）、载脂蛋白B（ApoB）、脂蛋白a（Lpa）用标准的方法在我院生化实验室测定。

        4 统计学分析
        应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。主要统计指标均进行正态性及方差齐性检验。根据实验数据的性质，正态分布的计量资料以ˉx±s 表示，两组间资料比较用两独立样本t 检验；偏态分布计量资料以中位数和四分位数间距表示，两组间资料比较用非参数检验(Mann-Whitney U-test)；计数资料以例数和百分数表示，两组间资料比较用χ2 检验。多样的均数如为偏态分布，经对数转换为正态分布后比较，用One-way ANOVA检验；CEM 以及LPa作为两分法变量，用其中位数来作为界点，同样其余各指标界点如下：CHOL 4.5 mmol/l、 LDL-C 2.5 mmol/l、HDL-C 1.1 mmol/l、TG 1.7 mmol/l、 hs-CRP 3mg/l
[5]。CEM、hs-CRP及血脂等生化指标及临床特征与ACS之间的关系采用单因素以及多因素逻辑回归分析。相关性分析用双尾Spearman相关检验。ROC曲线用来评估CEM以及hs-CRP水平。

        结果

        1 基线资料
        ACS及SAP患者组的基线临床资料如表1示，除两组冠脉造影结果显著不同，以及使用过他汀类药物的患者在SAP组、有高血脂者在ACS组中更为常见外，其余特征如性别、年龄、体重指数、PCI史、吸烟、高血压、糖尿病、CHD 家族史两组比较差异均无统计学意义。生化指标中除hs-CRP 在ACS组显著升高，而HDL-C在SAP组升高外，其余差异均无统计学意义。对照组在年龄、性别、体重指数等方面与其他两组具有可比性。

        表1  ACS及SAP组患者一般资料的比较


†For chi-square test; *for t -test; ††for Mann-Whitney U test.
 
        2 红细胞膜胆固醇含量
        三组CEM结果见图1所示，ACS组CEM值显著增高（149.50 μg/mg, 120.33 ~180.11 μg/mg），而SAP组CEM值为（79.98 μg/mg; 56.75 ~ 97.56 μg/mg）及对照组CEM值为（76.64 μg/mg, 62.12 ~91.84 μg/mg）。 

        CEM值经对数转换后方差分析显示ACS组较其他两组CEM值仍显著升高（P<0.001），而SAP组及对照组CEM值差别无统计学意义（P>0.05）。

        我们对于可能影响冠状动脉疾病活动性的临床指标进行单因素逻辑回归分析，结果如表2所示，CEM、hs-CRP、LPa 以及血脂障碍、病变血管都是ACS的预测因素，而他汀类药物的使用是ACS的保护因素。表3是在表2的基础上对与ACS相关的指标进行多因素逻辑回归分析，结果提示只有CEM、hs-CRP以及他汀类药物的使用与ACS之间具有独立显著的相关性。

表2  反映CAD活动性的危险因素的单因素逻辑回归分析(SAP vs.ACS)

      表3   反映CAD活动性的危险因素的多因素逻辑回归分析 (SAP vs. ACS)


        3 相关性分析
        CEM和各种临床变量的相关性，结果显示在ACS及SAP患者组中，CEM与血清总CHOL （r = 0.155； p = 0.078）、LDL-C（r = 0.130；p = 0.143）、HDL-C（r = -0.062；p = 0.489）、ApoA （r = 0.012；p = 0.895）、ApoB（r = 0.107；p = 0.245）及BMI（r = 0.033；p = 0.698）均不相关，与血清TG（r = 0.191；p<0.05）以及Lpa（r = 0.224；p<0.05）呈正相关。我们还发现CEM与血清hs-CRP（r = 0.328；p < 0.01）有显著相关（见图2）。另外使用过他汀类药物的患者CEM值（n = 36， 107.88 μg/mg，63.53 ~152.24 μg/mg）比不使用他汀类的患者CEM值（n = 107，135.18 μg/mg，83.66 ~186.70 μg/mg）明显降低（p<0.05）。CEM与病变血管的数目也显著相关（r = 0.324；p < 0.01）。没有明显病变血管的患者CEM值为74.31±29.67 μg/mg，明显低于1支病变血管的患者CEM值（122.25±47.89 μg/mg，p<0.05）, 2支病变血管患者CEM值（131.98±50.88 μg/mg；p<0.05），以及3支病变血管患者的CEM值（148.74±40.39 μg/mg；p < 0.01)。

        4  ROC曲线分析
       ROC分析（见图3）CEM曲线下面积是0.907 (0856 ~0.959)，而hs-CRP曲线下的面积是0.767 (0.686 ~0.848)，两者之间有显著差异（p < 0.01），这说明了CEM是一个优于hs-CRP能较好反映冠状动脉疾病活动性的一个指标。

        讨论
        本实验结果表明ACS患者CEM值显著升高，且多因素逻辑回归分析显示CEM水平升高与ACS有独立显著的相关性。本实验也发现CEM在SAP组及对照组之间无显著差异，这更进一步支持CEM仅仅是一个反映冠脉病变活动性的指标，而不是反映动脉粥样硬化的标记物。本实验的ROC分析结果显示，CEM的曲线下面积要大于hs-CRP，表明，CEM可能是另一个ACS的生物标记物，对于ACS的预测作用可能优于hs-CRP。

        急性冠脉事件如心肌梗死或不稳定型心绞痛的发生主要取决于易损斑块的破裂[6]，易损斑块破裂主要与以下几个因素密切相关：坏死脂质核心增大、斑块纤维帽变薄、平滑肌细胞减少，以及活化的巨噬细胞在纤维帽尖的积累，其中坏死脂质核心的大小对于粥样斑块的稳定性是关键[2]。易损斑块脂质核心的四分之一是由游离胆固醇组成的[7]，早期的观点认为斑块内的胆固醇主要来源于调亡的巨噬细胞，但巨噬细胞所含的胆固醇是酯化的[8]。
    
        现有的研究观点表明，这些游离胆固醇的主要来源可能是红细胞，Arbustini及Kolodgie等人[9,10]都发现在动脉粥样斑块的核心里存在一种只表达在红细胞膜上的整合蛋白，即血型糖蛋白A，这是斑块核心部分来源于红细胞的标志。而且红细胞比其他任何细胞所含有的游离胆固醇都要多[11]，红细胞进入斑块后可以释放膜上的胆固醇，使脂质核心增大。因此易损斑块脂质核心的大小与组成主要与红细胞进入斑块的量、总脂质的组成、CEM水平、脂质核心微环境的衰竭以及巨噬细胞有效清除坏死红细胞的能力有关[12]。

        本研究发现CEM与hs-CRP，LPa，TG水平具有相关，CEM与 hs-CRP具有相关性可能是因为它们都通过促进了与易损斑块相关的炎症来参与ACS的形成过程，CEM可以促进巨大氧化的LDL-C池形成，这是炎症细胞的化学引诱物，且是动脉粥样硬化形成和发展的关键物质[13]。

        结论
        本研究结果显示CEM水平与ACS具有显著的相关性，提示CEM可能是动脉粥样易损斑块的一个潜在的标记物，且CEM作为ACS的诊断指标可能优于hs-CRP。

参考文献
1.  Falk E, Shah PK, Fuster V. Coronary plaque disruption. Circulation, 1995, 92: 657–71.
2.  Tziakas DN, Kaski JC, Chalikias GK, et al. Total cholesterol content of erythrocyte membranes is increased in patients with acute coronary syndrome: a new marker of clinical instability? J Am Coll Cardiol, 2007, 49: 2081–9.
3.  Arroyo-Espliguero R, Avanzas P, Cosin-Sales J, et al. C-reactive protein elevation and disease activity in patients with coronary artery disease. Eur Heart J, 2004, 25: 401–8.
4.  Allain CC, Poon LS, Chan CS, et al. Enzymatic determination of total serum cholesterol. Clin Chem, 1974, 20: 470–5.
5.  De Backer G, Ambrosioni E, Borch-Johnsen K, et al. European guidelines on cardiovascular disease prevention in clinical practice. Third Joint Task Force of European and Other Societies on Cardiovascular Disease Prevention in Clinical Practice. Eur Heart J, 2003, 24:  1601–10.
6.  Davies MJ. The composition of coronary-artery plaques. N Engl J Med, 1997, 336: 1312-4.
7.  Tabas I. Cholesterol and phospholipid metabolism in macrophages. Biochem Biophys Acta, 2000,1529: 164–74.
8.  Guyton JR, Klemp KF. Development of the lipid-rich core in human atherosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 1996, 16: 4–11.
9.  Arbustini E, Morbini P, D’Armini AM, et al. Plaque composition in plexogenic and thromboembolic pulmonary hypertension: the critical role of the thrombotic material in pultaceous core formation. Heart, 2002, 88: 177–82.
10. Kolodgie FD, Gold HK, Burke AP, et al. Intraplaque hemorrhage and progression of coronary atheroma. N Engl J Med, 2003, 349: 2316–25.
11. Yeagle PL. Cholesterol and the cell membrane. Biochem Biophys Acta, 1985, 822: 267–87.
12. Arbustini E. Total erythrocyte membrane cholesterol: an innocent new marker or an active player in acute coronary syndromes? J Am Coll Cardiol, 2007,49: 2090-2.
13. Lin HL, Xu XS, Lu HX, et al. Pathological mechanisms of erythrocyte-induced vulnerability of atherosclerotic plaques Med Hypotheses. Med Hypotheses 2008;70:105-8.
 
文章来源：心血管网